Procédure d'opération de stérilisation en oxyde d'éthylène
(1) Selon les exigences du test, préparez la suspension des spores et les tranches bactériennes de Bacillus subtilis var. subtilis var. Niger. Les tranches bactériennes sont scellées dans des sacs en plastique en polyéthylène à double couche, 2 tranches par sac . 20 sont utilisées pour chaque test.
(2) Réglez un point dans les couches intérieures, moyennes et extérieures du stérilisateur, pour un total de 9 points. Placer un sac au milieu de chaque point, pour un total de 18 sacs de tranches bactériennes de test. Placer un autre sac (2 tranches) de tranches bactériennes à température ambiante comme contrôle positif.
(3) Effectuer une stérilisation de l'oxyde d'éthylène dans des conditions de charge complète en fonction de la concentration d'oxyde d'éthylène, du temps d'action, de la température et de l'humidité relative dans l'armoire spécifiée dans le manuel d'instructions. La charge complète dépend du but du stérilisateur. Après le traitement, retirez les tranches bactériennes, transférez-les à 5 ml de culture de culture du bouillon de nutriments et culturez-les dans un incubateur à 37 degrés. Observez les résultats finaux après 7 jours (test de culture qualitative).
Pour les tubes de bouillon de nutriments avec des résultats difficiles à juger, prenez 0,2 ml de suspension et inoculez la plaque de gélose nutritive. Utilisez un bâton s stérile pour vous propager uniformément et placez-le dans un incubateur de 37 degrés pour la culture. Après 48 heures, tenez-vous le frottis et observez la morphologie des colonies au microscope, ou effectuez d'autres tests pour déterminer s'il y a une croissance ou si la croissance est la bactérie d'essai. S'il ne s'agit pas des bactéries de test, le test doit être répété.
(4) Pendant le test, des groupes de contrôle positifs qualitatifs et quantitatifs et des groupes de contrôle négatif devraient être mis en place en même temps.
(5) Pour le groupe témoin positif quantitatif, placez le même lot de tranches bactériennes de test à température ambiante. Une fois que le groupe de test de désinfection ou de stérilisation a atteint le temps d'action spécifié, placez immédiatement deux morceaux des tranches bactériennes dans des tubes à essai contenant 5,0 ml de PBS et secouez chacun pour 80 fois. Prenez la solution de lavage et comptez la culture des bactéries vivantes selon la méthode indiquée dans 2.1.1.3.
(6) Pour le groupe témoin positif qualitatif, placez les tranches bactériennes de test du même lot à température ambiante. Une fois que le groupe de test de stérilisation a atteint le temps d'action spécifié, inoculez immédiatement 2 des tranches bactériennes en 5,0 ml de milieu de bouillon de nutriments, placez-les dans un incubateur pour la culture qualitative et observez s'il y a une croissance bactérienne.
(7) Pour le groupe témoin négatif, inoculez 2 tranches d'échantillon non contaminées du même lot en 5,0 ml de milieu de bouillon de nutriments et placez le milieu du bouillon nutritif non inoculé dans un incubateur pour la culture qualitative pour observer s'il y a une croissance bactérienne.
(8) Le test est répété 5 fois.
(9) Dans chacun des 5 tests, le nombre bactérienne récupéré des tranches bactériennes de contrôle positif devrait se situer entre 5 × 10 CFU / tranche et 5 × 10 CFU / tranche; Le groupe témoin positif qualitatif devrait avoir une bonne croissance bactérienne; et le contrôle négatif ne devrait pas avoir de croissance bactérienne. Si les résultats de contrôle positif ou négatif ne répondent pas aux exigences ci-dessus, le test sera invalide et répété.
Règlements d'évaluation
Dans les cinq tests de stérilisation, le groupe témoin positif quantitatif dans chaque test avait un nombre bactérien détecté et récupéré de 5 × 10 CFU / pièce à 5 × 10 CFU / pièce; Le groupe témoin positif qualitatif a connu une bonne croissance bactérienne. Le contrôle négatif ne devrait avoir aucune croissance bactérienne. Lorsque toutes les pièces bactériennes de test n'ont aucune croissance bactérienne, la stérilisation est considérée comme qualifiée.
Précautions
(1) La température et l'humidité relative ont une grande influence sur l'effet de stérilisation de l'oxyde d'éthylène, de sorte que les conditions pertinentes dans le test doivent être strictement contrôlées.
(2) Le liquide d'oxyde d'éthylène peut dissoudre le polyéthylène, le chlorure de polyvinyle, etc., et son liquide ne doit pas être coulé sur ces articles. L'oxyde d'éthylène, qu'il soit liquide ou gaz, peut endommager les produits celluloïdes, de sorte que des soins doivent être pris pendant le test.
(3) L'oxyde d'éthylène est inflammable et explosif. Des mesures de prévention des incendies et des explosions doivent être prises sur le site d'opération, et les flammes ouvertes et les étincelles électriques ne devraient pas être autorisées.
(4) L'inhalation de gaz d'oxyde d'éthylène excessif peut provoquer des symptômes d'empoisonnement tels que les maux de tête et les vomissements, et dans des cas graves, il peut provoquer un œdème pulmonaire. L'environnement de travail devrait avoir une bonne ventilation. Au cours de la journée de travail de 8 heures, la concentration d'oxyde d'éthylène ne doit pas dépasser 1,82 mg / m3 (1 ppm), et la concentration d'exposition pendant les travaux de 15 minutes ne doit pas dépasser 9,1 mg / m3 (5,0 ppm). Si des symptômes d'empoisonnement se produisent, laissez les lieux immédiatement. Pour les cas doux, respirez l'air frais jusqu'à ce que les symptômes disparaissent; Pour les cas graves, envoyez à l'hôpital pour un traitement à temps.
